一、实验目的 

　　1．学会实验小鼠的抓取、固定和性别、年龄鉴定。

　　2．掌握小鼠的灌胃，皮下、肌肉、腹腔和尾静脉注射方法。

　　3．掌握小鼠的常规采血方法和处死法。

　　二、实验器材和动物 

　　弯剪一把，眼科弯无钩摄一把，单面刀片一片，1ml注射器两个，5号针头两个，灌胃针头一个，大号平镊一把，棉签4～6根，腊块一个。试管架一个，试管四支，细塑料导管一根，小培养皿一个，干棉球若干，大头针若干。75％酒精棉球，8％碘酒棉球。小鼠两只(雌雄各一只)。

　　三、实验方法 

　　1．性别鉴定

　　小鼠的性别主要靠观察动物肛门与生殖器之间的距离来区分，距离较远的为雄性，距离较近的为雌性(图1)。

　　图1  小鼠性别鉴定：左侧为雄鼠，右侧为雌鼠

　　2．年龄鉴定

　　小鼠主要由专门实验动物饲养场供应，在那里每一种动物都有生长的背景记录。一般在领动物时可直接向饲养员询问，也可根据体重年龄相关曲线(图2)间接查得。

　　图2  大、小鼠年龄与体重间的关系

　　3．灌胃

　　操作者左手抓取并固定住小鼠。使其头颈拉直，右手持接有灌胃针头的注射器，针头沿鼠右侧嘴角，顺着舌下插入口咽，针头稍上撬便于通过食道进入胃里，这时方可给药。药量为0.3ml，进针过程中，若动物有呕吐动作或强烈挣扎，则表明针头插入气管，这时，应及时退针，不可推药，待动物恢复安静后，再重复操作。

　　4．皮下注射

　　根据实验的需要，可以选择任一部位做皮下注射，但一般都取背部、后肢和腹部等部位。注射时，操作者左手抓取和固定动物，并暴露注射部位，右手持注射器，以约150角进针到皮下后，针头压平，顺皮下插入约1cm即可注射。

　　5．肌内注射

　　小鼠的肌内注射多在大腿外侧肌肉进行，而且注射液量很有限，小鼠一般最大注射量0.2-0.3ml，注射前需备皮，左手固定动物，以150角刺入肌肉，回抽无血即可推出药液。

　　6．腹腔注射

　　这是最常用的给药方法。把动物固定在左手掌内，右手持注射器，以150角由腹部外生殖器上0.5～1cm处进针，到皮下后压平针头，在皮下向前移动针头0.2～0.3cm后，再以450～600角刺入腹腔，若有明显的落空感即说明已进入腹腔，这时回抽无血方可注射。

　　7．尾静脉注射

　　将鼠装入鼠盒中，先用湿纱布擦净尾巴，再用75％酒精棉球消毒。待酒精干后，左手拇指和食指捏住尾巴远心端，以适当角度(150～300)对准尾巴远端的血管进针，当针头斜面基本进入血管后使其平伸，然后轻轻推动注射器栓，如阻力大，不可硬性推药，如果推动阻力很小，并能看到药液顺血管移动，则可注完全部药液。

　　注意： 

　　(1)尾静脉注射往往一次不能成功。但只要不使尾静脉肿胀而造成血管模糊不清，均可由尾静脉近心端依次重复注射，直到成功为止。

　　(2)注入药物后退针要快，并用干棉球加压止血1～2min。

　　8．摘眼球采血法

　　有些需要血样较多的实验可利用该法采血。我们知道眼球底部连于眶动脉和眶静脉，那么只要将眼球摘除，血液就会从血管内流出。

　　其具体方法是，操作者左手抓住并固定鼠头在实验台上，稍使压力使其眼球外突，右手持弯无钩小镊顺势去眼球，左手拇指和食指捏住并固定其头部，右手迅速提起鼠尾和后肢，使鼠倒置。在收血小试管上，待其血流停止，即将鼠放回原处，有时动物还能存活。本法采血较多，一般一次可得1ml左右，但缺点是动物采血后多数死亡。

　　9．眼后眶静脉丛导管法采血

　　采用一根细塑料管(一头在火上拉细并剪成似针头的斜面尖端)左手把鼠头侧位固定在实验台上，右手持塑料管尖端刺入眼球和眼眶后界之间的后眼眶静脉丛，将细管移入收血皿内摆正，血便顺管放出。这一技术放血量不大，而且导管上往往还要沾去一部分血，但其优点是动物很少死亡，血液不易污染，还可重复采血。

　　用这种方法不能采集到无菌的血样，血液中可能混有眼窝内的组织液和腺体分泌物，污染血样。对同一只眼多次采血，可能引起一些并发症，如眼出血、炎症和失明等。另外，这种技术可能会对一些人视觉上产生不愉快的感觉。鉴于以上这些原因，有些国家禁止使用这种方法。

　　10．颈动脉或颈静脉采血法

　　将动物乙醚吸入麻醉，背卧固定剪去颈部被毛，并用合适的抗生素擦净。做颈动脉、颈静脉分离术，使其暴露清楚后，用注射针沿颈动脉或静脉平行方向刺入，抽取所需要血量，也可插入一塑料导管直接放血。采用这种方法，体重20g小鼠可采血1ml左右，体重300g大鼠可采血8～10ml。

　　11．股动脉或静脉采血法

　　麻醉动物，背卧固定，切开左或右腹股沟的皮肤，做股动脉或静脉暴露分离手术，然后用注射器(或插管)采血。连续多次股动脉采血时，则采血部位要选择尽量靠远心端。本法采血量大致同颈动脉或静脉采血量。

　　12．尾尖采血

　　多用乙醚吸入麻醉后，剪去小鼠尾尖1～2mm(大鼠3～5mm)，然后自尾部向尾尖按摩，血从尾尖血管流出。为了采得较多的血，常将鼠尾泡于50℃水中，擦干后剪去尾尖。采血后用橡胶布扎尾尖进行压迫止血，亦可用电烧灼止血。

　　若需反复多次尾尖采血，则在每次采血时只剪去尾尖很少一段，采血后，先用棉球压迫止血并立即用6％液体火棉胶涂于尾部伤口，使伤口外结一层火棉胶薄膜，保护伤口。当然也可以采用交替切割尾静脉方法取血，该法是用一锋利的刀片在尾上切破一段静脉，使血由切口流出。每次可采血0.3～0.5ml。三根尾静脉可以从尾尖部开始交替切割，切割后用棉签压迫止血，约经3d伤口结痂长好。

　　13．心脏采血

　　动物背卧固定，剪去心前区被毛，常规消毒皮肤，在左侧第3～4肋间，用左手食指触摸到心脏搏动，右手取注射器(4～5号针头)，选择心跳最强处进针，当针刺入心脏时，血液由于心脏跳动的力量而自动进入注射器(图2-3)。

　　14．腹主动脉采血

　　将动物乙醚吸入麻醉后背卧固定于腊板上，立即剖开腹腔，找到腹动脉(图3)(位于后腔静脉左侧沿着脊柱的正中线后行，其腹面有左肾静脉通过)，用注射器采血即可。采血量一般小鼠可达1ml左右，大鼠10ml左右。

　　小鼠心脏采血

　　大鼠腹主动脉示意图